银杏（Ginkgo Biloba L.）为我国特有孑遗植物，又名白果树，其资源占世界总量的70%以上[1～3]。银杏的叶、果、树皮均可入药，尤以叶的药用价值最高。银杏叶中含有多种生理活性成分，如黄酮类化合物、萜内酯等，具有改善心脑血管循环、抗过敏、抗病毒、抗癌、抗衰老及降低胆固醇等作用，而且银杏叶提取物毒副作用很小，食用安全[4，5]，我国卫生部已批准将银杏叶提取物作为新的保健食品添加剂[6]。银杏叶的提取方法包括有机溶剂萃取法、水提取法、碱性稀醇或碱性水提取法、超临界萃取法、超声波提取法、酶法等[7]，本文主要研究采用乙醇逆流萃取工艺从银杏叶中提取有效成分的工艺设计。

　　1 材料与方法

　　1.1 试验材料

　　干银杏叶：泰兴收购；

　　芦丁（生化试剂）：上海生化试剂厂；

　　食用酒精（95%）：符合GB 10343-2002标准；

　　氢氧化钠（分析纯）：国药集团化学试剂有限公司；

　　硝酸铝（分析纯）：国药集团化学试剂有限公司；

　　亚硝酸钠（分析纯）：国药集团化学试剂有限公司；

　　722光栅分光光度计：上海第三分析仪器厂。

　　1.2 试验方法

　　1.2.1 银杏叶总黄酮浸出率的计算

　　总黄酮浸出率（%）＝（提取液所含黄酮质量（g）/银杏叶质量（g））×100%

　　1.2.2 影响银杏叶总黄酮提取的

　　因素

　　影响银杏叶总黄酮提取的因素有：浸提时间、乙醇浓度、浸提温度及浸提液固比等。

　　1.2.3 银杏叶总黄酮提取工艺条件

　　选择

　　根据企业现有平转逆流浸提设备的实际，实验计划为6级逆流浸提，每级20分钟，分别选取对浸提效果影响显着的乙醇浓度（60%、70%、80%）、浸提温度（50℃、60℃、70℃）、两因素三水平进行交互试验，以确定银杏叶浸提的乙醇浓度和湿度，再在适合的条件下确定浸提液固比，以达到浸提工艺的确定。

　　1.2.4 银杏叶总黄酮的检测

　　准确称取在120℃烘至恒重的芦丁20mg，以60%乙醇溶解定容置至100mL。取25mL芦丁乙醇溶液用蒸馏水稀释至50mL（即芦丁浓度为0.1mg/mL），准确吸取1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL分别置于10mL具塞试管中，蒸馏水空白对照，以30%乙醇补足至5mL。加5%亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，放置6min；再加10%硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，再放置6min；再加4%氢氧化钠溶液4mL；用蒸馏水补足至l0mL，放置20min，在波长510nm处测定各试管中溶液的吸光度（蒸馏水作空白）。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘出标准曲线图[8]。得回归方程C=0.1816A-0.0049；R2=0.9990。

　　用同样方法可测得各浸提液样品的吸光度值，准确吸取样品溶液1mL置于10mL具塞试管中，空白取蒸馏水1mL，以下操作同标准曲线制作。由对应的吸光度标准曲线可计算出浸提液中总黄酮含量。

　　2 结果与分析

　　2.1 浓度、温度对浸提效果的影响

　　以液固比4∶1，分别以60%、70%、80%的乙醇浓度在50℃、60℃、70℃条件下，进行6级逆流浸提，单级浸提时间为20分钟。交互试验方案和结果见表1。

　　从表1结果的方差分析得出，温度对浸提效果的影响大于乙醇溶液浓度的影响。其中，浸提温度对银杏叶总黄酮浸出率的影响达到显着水平，温度的提高，有利于银杏叶总黄酮的浸提。在选定的水平范围内，溶液浓度提高则浸出率升高，但各水平间的差异极小，对银杏叶总黄酮浸出率的影响不是很明显。从分析结果来看，最佳的水平组合应为A5B5，即在60℃条件下用70%浓度的乙醇溶液进行浸提效果最好。

　　2.2 液固比对浸提效果的影响

　　采用液固比为3、4、5、6四种比例，在60℃条件下用70%浓度的乙醇溶液，进行6级每级20分钟逆流浸提。结果见图1。

　　从图1可看出，提高液固比有利于提高银杏叶总黄酮的浸出率，但提高水平不大。由于银杏叶吸附浸提溶液量大（为银杏叶2倍），在企业连续逆流浸提过程中无挤压（或真空）脱溶操作，故液固比小会直接影响到浸提总得率。液固比大固然能获得更大的银杏叶总黄酮的浸出率，但也会提高浓缩和溶剂回收成本。因此，选择液固比为4是较理想的。

　　3 结论

　　在设定的6级逆流浸提，每级20分钟的条件下，不同的乙醇浓度、浸提温度和液固比对银杏叶黄酮提取效果均产生不同程度的影响，其中温度和浓度的影响显着。银杏叶黄酮乙醇浸提的理想条件为：4倍（v/w）的70%浓度乙醇溶液于60℃条件下进行6级（单级20分钟）逆流浸提。

　　参考文献

　　[1]李明新。我国银杏产销态势与发展策略。林业科技开发，2000，14（1）：13-14.

　　[2]梁立兴等。我国银杏产业发展前景预测及战略调控。林业科技开发，1999，13（3）：6-7.

　　[3]江德安。叶用银杏研究进展。孝感学院学报，2002，21（6）：63-66.

　　[4]中国科学院植物研究所等。治疗冠心病的银杏叶制剂及其药理实验。中草药通讯，1972，4：15-48.

　　[5]江苏新医学院。中药新辞典（上）。上海科学技术出版杜，1966：36.

　　[6]刘俊红。银杏叶的保健作用及其功能保健食品。食品研究与开发，1999，20（6）：4B 51.

　　[7]冯晓萍等。银杏叶黄酮提取工艺研究现状。四川化工与腐蚀控制，2002，5（2）：13.

　　[8]李纯等。银杏叶总黄酮提取测定方法研究。安徽农学学报，1998，14（3）：20.
来源：食安中国