《食品安全导刊》刊号:CN11-5478/R 国际:ISSN1674-0270

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HPLC法同时测定茶叶中咖啡因和儿茶素

2021-08-23 16:48:38 来源: 食品安全导刊

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胡旭倩1,2,唐销蓉1,2,姚菲菲1,2,骆 灿1,2
(1.赞宇科技集团股份有限公司,浙江杭州 310009;
2.浙江金正检测有限公司,浙江义乌 322000)
摘 要:本文旨在建立HPLC法同时测定茶叶中的5种儿茶素类(EGC、C、EC、EGCG、ECG)及咖啡因(CAF)的方法。结果表明,5种儿茶素类和咖啡因在0.2~2.0 mg/mL的范围内线性良好,相关系数为0.999 11~0.999 95,为0.24%~0.57%,方法回收率为95.9%~100.6%。本方法简单、准确、重现性好,可用于茶叶中儿茶素类和咖啡因的定量检测。
关键词:茶叶;HPLC;儿茶素类;咖啡因
茶多酚具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、调血脂和降血糖等药理作用,被广泛应用于食品、医药保健品、功能性饮料和化妆品中[1-3]。儿茶素是茶多酚的主成分,也是其主要的药理活性物质,占茶多酚含量的60%~80%[3-5]。
1 材料和方法
1.1 仪器与试剂
Agilent 1260超高效液相色谱仪(配紫外检测器)(美国Agilent公司);超声波振荡器(昆山禾创超声仪器有限公司);数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司);涡旋混合仪(上海精科实业有限公司);纯水净化仪(杭州永洁达净化科技有限公司);甲醇为色谱纯(美国大地公司);甲酸为分析纯(上海安谱实验科技股份有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 流动相的配制
①流动相A(0.1%甲酸水)。1 000 mL水中加入1 mL的甲酸,超声脱气备用。②流动相B(0.1%甲酸甲醇)。1 000 mL甲醇中加入1 mL的甲酸,超声脱气备用。
1.2.2 标准溶液配制
(1)标准储备溶液的配制。准确称取儿茶素(C)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)和咖啡因(CAF)0.100 0 g(精确到0.000 1 g)于50 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,配制成浓度约为2.0 mg/mL的标准储备液。
(2)标准混合工作溶液的配制。用甲醇溶液稀释儿茶素及咖啡因的混合标准储备溶液,得到适量质量浓度的混合标准工作溶液。
1.2.3 色谱条件
安捷伦C18(4.6 µm×250 mm)色谱柱;柱温30 ℃;流速0.8 mL/min,进样量20 µL,紫外检测器检测,检测波长:280 nm,流动相条件如表1所示。
1.2.4 提取方法
称取1.0 g均匀磨碎的试样于50 mL离心管中,加入在75 ℃中预热过的70%甲醇溶液30 mL,用玻璃棒充分搅拌均匀湿润,立即移入75 ℃水浴中,浸提30 min,期间不间断搅拌几次,取出,冷却至室温。用70%甲醇溶液定容至50 mL,摇匀,滤液过0.45 µm滤膜,上机待测。
2 结果与分析
2.1 检测波长的选择
选取一定浓度的混合标准工作溶液,用二极管阵列检测器在200~400 nm的波长范围内进行扫描,5种儿茶素分别在210 nm和280 nm处有两个最大吸收波长,咖啡因在280 nm处有最大吸收波长。鉴于梯度洗脱时,在210 nm的波长下检测时,基线漂移比较明显,故本方法采用280 nm为检测波长。
2.2 流动相添加剂的选择
本文在相同的色谱条件下,选取一定浓度的混合标准工作溶液进行进样分析,综合考虑6种物质的出峰时间、峰形和分离度等因素,故本文选择甲酸为流动相添加剂。
2.3 提取方法的选择
对同一茶叶样品在相同的色谱条件下,分别用传统加热浸提法和超声浸提法在70%甲醇溶液下提取30 min。结果表明,经过相同时间的提取,传统的加热浸提法提取率明显高于超声浸提法,故本方法选用加热浸提法。
2.4 提取时间的选择
称取同一茶叶样品,在相同的色谱条件下,用70%的甲醇溶液在75 ℃的水浴中分别提取10 min、20 min、
30 min、40 min、50 min和60 min。结果表明,加热浸提时间从30 min开始,提取率开始缓慢下降(详见表图1)。因此,本实验选取30 min为最佳提取时间。
2.5 方法线性关系、精密度和重现性
EGC、C、EC、EGCG、ECG和CAF在0.2~2.0 mg/mL的范围内线性良好,相关系数为0.999 11~0.999 95,为0.24%~0.57%,回收率为95.9%~100.6%(详见表2)。本方法简单、准确、重现性好,可用于茶叶中儿茶素类和咖啡因的定量检测。

3 结论
本研究以茶叶中EGC、C、EC、EGCG、ECG和CAF为研究对象,采用酸性流动相梯度洗脱同时测定了茶叶中5种主要儿茶素和咖啡因的含量。实验结果表明,茶叶中的EGC、C、EC、EGCG、ECG和CAF经70%甲醇溶液在75 ℃加热浸提30 min,能够充分被提取。本方法简单、准确、重复性好且成本低廉,可用于茶叶中咖啡因和儿茶素的
检测。
参考文献
[1]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法:GB/T 8313—2008[S].北京:中国标准出版社,2008.
[2]王丽丽,陈键,宋振硕,等.茶叶中茶多酚检测方法研究进展[J].茶叶科学技术,2013(4):6-12.
[3]张晓梦,倪艳,李先荣.茶多酚的药理研究进展[J].药物评价研究,2013,36(2):157-160.
[4]王增明,郭庆东,谢芳,等.HPLC测定茶多酚中儿茶素类及咖啡因含量[J].中国药学杂质,2011,46(21):1674-1676.
[5]刘小乔,李忠岐,高静,等.茶多酚中儿茶素类的HPLC分析[J].光谱实验室,2012,29(5):2611-2615.
作者简介:胡旭倩(1992—),女,浙江义乌人,本科,工程师。研究方向:食品安全检测。
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