摘 要：本文对湿米粉中菌落总数不确定度进行评定，确定每批样品中菌落总数的置信区间。对20份不同批次湿米粉的检验数据利用贝塞尔公式计算合并样本标准差的方法，采用A类不确定度评定。本研究的扩展不确定度为0.0520(以对数计)，此方法适合于菌落总数检验结果的评定。本研究建立的方法可以对湿米粉的菌落总数进行不确定度评定，也适合各大类食品样品检验中菌落总数的不确定度评定。

　　关键词：湿米粉 菌落总数 不确定度

　　测量不确定度的定义是表征合理地赋予被测量之值分散性，与测量结果相联系的参数[1]。GB/T 27025-2008《检测和校准实验室能力的通用要求》[2]中明确规定：检测实验室应具有并应用评定测量不确定度的程序。某些情况下，检测方法的性质会妨碍对测量不确定度进行严密的计量学和统计学上的有效计算。这种情况下，实验室至少应努力找出不确定度的所有分量且作出合理评定，并确保结果的报告方式不会对不确定度造成错觉。因此，不确定度评定应该是实验室质量管理体系的重要组成部分，在常规的实验室工作中应包含对检测结果的不确定度评定。但目前不确定度评定大多在理化实验室中开展，微生物检验中不确定度评定虽然有一些报导，但在实验室工作中实际应用并不多。基于食品抽样中基本按大类抽样来进行评价，如熟肉制品、非发酵性豆制品、现榨果汁、湿米粉等等，且实验中一般都是每份样品进行两次平行测定，现按照GB4789.2-2010[3]对湿米粉中菌落总数测定结果的不确定度进行评定，并确定样品中菌落总数的置信区间，为其它大类食品检测结果的不确定度评定提供参考。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料与仪器

　　平板计数琼脂(北京陆桥技术有限责任公司)，样品来源于市场上监督抽样。生化培养箱(SPX-150型，扬州惠科电子有限公司，控温范围：0℃～60℃)、立式压力蒸汽灭菌器(LMQ.C/3260J，山东新华医疗器械股份有限公司)。

　　1.2 检验方法[3]

　　称取25g样品置盛有225mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1～2min，制成1∶10的样品匀液。用1mL无菌吸管吸取1∶10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1∶100的样品匀液。同法操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。根据对样品污染状况的估计，选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。及时将15～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝固后，将平板翻转，

　　36℃±1℃培养48h±2h。结果可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。

　　2 结果

　　2.1 湿米粉菌落总数检测结果

　　随机抽取本科室检测的20份不同批次的湿米粉数据，每份样品做两个平行，得到每个样品的菌落总数，采用合并样本标准差进行计算。检验结果和计算过程见表1。

　　2.2 不确定度来源及分析

　　测量不确定度一般由若干分量组成，其中一些分量可根据一系列测量值的统计分布为A类不确定度评定;另一些分量基于经验或其他信息获得的概率密度函数，为B类不确定度评定[1]。同一种化学物质有均一性，但不同的微生物在一起培养过程中表现不一定相同，明显显现出不均一性。尤其是不同微生物之间有互生、拮抗等相互作用，即一方给另一方提供生长因子，或相互提供生长因子，或一方产生抑菌物质抑制另一方[4]。因此，按化学物质检测建立数学模型去找出产生不确定度的分量是不现实的。但也遵循一定的原则，在菌落总数检验过程中，样品的称量、加稀释液、混匀、递增稀释、培养温度、时间、菌落计数等都会引入误差，产生不确定度。但由于微生物的特殊性，在实验中，往往是平行操作的不同平皿，计数结果也会有很大差异，因此，本实验仅考虑由测量结果散发引入的不确定度分量，采用A类不确定度评定。

　　2.3 不确定度的评定

　　微生物菌落总数的测定与一般化学成分测定不同，当菌落总数达到3个稀释度时，同一样品平行操作的结果会有数千甚至数万的差异(见表1)，稀释度越高，差异越大。因此，直接对检验结果取对数后，再计算出其标准不确定度。根据贝塞尔公式，可以得到检验结果对数值的合并样本标准差：

　　s(lgxk)：第k个样品标准差平方。

　　m：样品数量;

　　n：样品重复检验次数。

　　因样品为平行检验所以标准不确定度为：

　　2.4 扩展不确定度计算

　　取置信概率为95%，根据自由度，查t分布表，得到k=2.09，则U=k×u(lgxk)=2.09×0.02488=0.0520。

　　即置信概率为95%时，其测量结果取值区间分布于lgxi±0.05200之间,这个取值区间适合于这20个样品中任何一个样品的测量。以第1个样品为例，样品菌落总数为5.4444±0.0520，分布于5.4964～5.3924范围内，取反对数后，菌落总数结果分布于310000cfu/g～250000cfu/g之间，同样可计算出其余样品菌落总数的置信区间(见表1)。

　　3 小结

　　3.1 本文分析了湿米粉中菌落总数检验的不确定度评定方法与结果。由于菌落总数检验结果的散发性较大，直接计算合并样本标准差不适合，将检验结果取对数后，用贝塞尔公式计算合并样本标准差，再求不确定度更方便，并且适合于每个样本。同样，利用同类样品的日常检验数据，用合并样本标准差求检验结果的不确定度，从而得出菌落总数的置信区间，再对样品的检验结果进行判断。

　　3.2 不确定度计算是一个纷繁复杂的过程，步骤繁琐，容易出错，可利用Excel的编程和计算功能，建立通用的适合实验室测量不确定度计算模型，并随着样品批次的不断增加，其检验结果可随时加入到合并样本中，即将日常检验数据动态填入便可得到测量不确定度，这样必能大大减少工作量，提高工作效率。

　　参考文献

　　[1] 国家质量监督检验检疫总局JJF1059.1-2012测量不确定度的评定与表示[s].北京：中国质检出版社，2013.

　　[2] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会GB/T 27025-2008检测和校准实验室能力的通用要求[s].北京：中国标准出版社，2008.

　　[3] 中华人民共和国卫生部.GB 4789.2-2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数[s].北京：中国标准出版社，2010.

　　[4] 李志明.影响菌落总数测定结果的特殊因素[J].中国卫生检验杂志，2008，18(2)：371-384.