摘　要：评定速冻水饺金黄色葡萄球菌检测结果的不确定度，检测方法依据GB 4789.10-2010，分析速冻水饺中金黄色葡萄球菌计数结果的不确定来源，并对实验结果取对数后评定其不确定度。结果显示扩展不确定度为0.05，金黄色葡萄球菌含量为1.6×10⁴~2.7×10⁴CFU/g。结论为不确定度的分析能够有效掌握检测结果的可信程度和准确性。
    关键词：金黄色葡萄球菌　计数　不确定度　评定
    金黄色葡萄球菌系指一类革兰氏阳性球菌，其排列成葡萄状、无芽胞和荚膜，是评价食品卫生质量的重要指标之一。美国疾病控制中心报告指出，由金黄色葡萄球菌引起的感染占全球第2位，仅次于大肠埃希菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大占到45%，我国每年也有此类中毒事件发生。因此，做好金黄色葡萄球菌的检测尤为重要，特别是我国卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金黄色葡萄球菌限量存在，而金黄色葡萄球菌计数存在很大的分散性，故做好金黄色葡萄球菌计数不确定度评定更为重要。
    1 原理与方法
    1.1 评定原理
    不确定度含义为:表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数。本文介绍的是依据GB 4789. 10-2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》，在同一相对恒定的实验条件下，由检测人员对同一份质控菌液进行4次独立检测，共做20次，然后对检测结果进行不确定度评定。
    1.2 检测方法
    25mL检样+225mL稀释液，均质；
    选择2个连续的适宜稀释度的样品均液，每个稀释度分别吸取1mL；样品匀液以0.3mL、0.3mL、0.4mL接种量分别加入3块Baird-Parker平板，然后用无菌L棒涂布整个平板，36℃，48h；
    计数及血浆凝固酶试验；
    报告。
    2 数学模型及不确定度来源
    2.1 数学模型     T-样品中金黄色葡萄球菌菌落数；
    A-某一稀释度典型菌落的总数；
    B-某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数；
    C-某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数；
    d-稀释因子。
    2.2 不确定度分量的主要来源
    在微生物检测中一般认为不确定度来源于培养基、培养条件、计量器具校准、操作人员技能等。由于重复检测结果的发散性较大，所以本文只对称样、稀释、重复性检验、Baird-Parker培养基储存条件引起的不确定度进行分析。
    3 各分量不确定度的评定
    3.1 样品称量过程产生的不确定度
    3.2 样品制备过程中引入的不确定度评定
    3.2.1 天平引入的不确定度
    本实验室采用精度为0.01g的电子天平，根据JJG 1036-2008《中华人民共和国计量检定规程：电子天平》规定，该准确级(Ⅱ)的天平在0~500g称量范围的MPE为±0.5g，天平线性MPE为矩形分布，天平称量引入的不确定度。     3.2.2 玻璃器皿引入的不确定度
    用250mL的量筒量取225mL无菌生理盐水缓冲液加入，量筒按JJG 196-2006常用玻璃量器的容量允差为2.0mL。由于按级使用的数字式仪表、测量仪器最大允差误差导致的不确定度属于矩形（均匀）分布，则玻璃容器的标准不确定度分别为：     3.2.3 天平和玻璃器皿产生的相对合成不确定度     所以     3.3 样品稀释过程产生的不确定度
    微生物检验常用的吸管有1ml、10ml B级两种，根据JJG 196-2006常用玻璃量器规定，B级1mL吸管，容量允差为±0.015/ml；B级10mL吸液管，容量允差为±0.1/ml。取矩形分布，它们的标准不确定度分别为：      所以，连续稀释产生的相对标准不确定度：
 
    3.4加样体积产生的相对不确定度
    由于检测中是吸取1mL的加样体积分别以0.3mL、0.3mL、0.4mL，加入3个Baird-Parker平板中，使用的是1mL吸管，那么加样所产生的不确定度为：     那么：     3.5 样品重复性检验的不确定度
    重复检测引起的不确定度，主要是检测过程中，在多种因素作用下随机所得各次金黄色葡萄球菌数数值不同引起的。由于检测结果数值的发散性较大，因此采用统计学方法，以金黄色葡萄球菌含量的对数求不确定度。同一位操作人员分别对同一批受污染的5份速冻水饺各自4次独立检测的金黄色葡萄球菌含量和计算过程见表1。  
    则重复性的标准差为：     4 合成不确定度     合成标准不确定度：
          
    通常取包含因子k=2,则平板计数的扩展不确定度：
 
    该样品中的金黄色葡萄球菌的含量x=10^4.3298=21369= 2.1×10⁴，检测结果的对数均值范围为4.3298±0.1006，金黄色葡萄球菌的取值范围1.6×10⁴~2.7×10⁴CFU/g。
    5 讨论
    按GB 4789.10-2010 的操作规程，本次金黄色葡萄球菌计数是由同一位操作人员对同一批速冻水饺5个样品进行4次独立检测完成的，由于各组之间的测量条件可能会稍有不同，因此不能直接用贝塞尔公式对总共5×4次测量计算实验标准差，而必须计算其合并样本标准差，合并样本标准差也称为组合实验标准差。
通过对受污染的速冻水饺中金黄色葡萄球菌计数结果的不确定度识别和评定得知：此次检测结果的不确定度主要是由样本的重复检测、样本稀释、加样体积、样品称样四方面产生的，尤其是以金黄色葡萄球菌重复检测过程中所产生的A类不确定度为主要来源。由此可见，严格控制实验环境、培养条件、以及提高操作人员的技能，是降低来自这方面的不确定度的有效措施。
    参考文献：
    [1] GB 4789.10-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验.
    [2] 张文利，刘月芳.BP培养基经不同条件贮存后对金黄色葡萄球菌检测结果的影响[J].中国卫生检验杂志，     2005,15(5):620-621.
    [3] 王晓红，姜娴.食品中菌落总数检测结果的不确定度评定[J].中国卫生检验杂志，2011,21(11):2799-2800.
    [4] 王李宝，凌云，刘绿叶等.水产品金黄色葡萄球菌检测结果不确定度的评定[J].食品科学，2010,3(10):212-215.
    [5] 张洪军，张铭华.食品中金黄色葡萄球菌平板计数不确定度的评定[J].微生物学杂志，2013,33(2):39-42.
    [6] 徐丽萍，商晓春，舒青青.质控金黄色葡萄球菌计数结果不确定度评定[J]. 中国卫生检验杂志，2011,21(3):654-656.