《食品安全导刊》刊号:CN11-5478/R 国际:ISSN1674-0270

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花生芽中6-苄基腺嘌呤的测定方法研究

2018-05-30 15:34:22 来源: 食品安全导刊

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  建立了高效液相色谱法测定花生芽中6-苄基腺嘌呤含量的方法。6-苄基腺嘌呤的检测波长为267nm;流动相为甲醇-20mmol/L乙酸铵溶液(50:50,v/v);前处理的提取方式为超声波提取法;高效液相色谱法测定花生芽中6-苄基腺嘌呤含量的在1-50mg/L范围线性良好,相关系数为0.9998,检出限为0.1mg/kg,精密度为1.82%,用该方法测定花生芽中6-苄基腺嘌呤含量的回收率在90%以上。
 
  6-苄基腺嘌呤(6-Benzylaminopurine)分子式是C12H11N5,分子量为225.25,熔点:230℃,形状为白色晶体,难溶于水,微溶于乙醇等有机溶剂,易溶于酸和碱且性质稳定。6-苄基腺嘌呤是一种人工合成的细胞分裂素,主要用于促进细胞分裂、细胞增大、种子发芽和果实生长等,我国曾经允许在豆芽生产上的应用。6-苄基腺嘌呤作为植物生长调节剂,其安全性目前没有结论,并且缺乏食品添加剂工艺必要性,目前我国的标准GB2760已经禁止6-苄基腺嘌呤作为食品用加工助剂生产经营和使用。
 
  6-苄基腺嘌呤更多的报道是关于在豆芽生产中的应用,俗称的“无根粉”主要成分就是6-苄基腺嘌呤,对于花生芽不管是生产方面或者是检测方面报道较少。花生芽被认为一种食疗兼备的食品,营养丰富,并富含维生素及各种氨基酸和微量元素,花生芽的生产和销售越来越普遍,对花生芽的各项指标的检测方法有研究的意义。
 
  6-苄基腺嘌呤的检测方法主要是光谱法和色谱法,光谱法灵敏度不够,基质干扰大,色谱法具有准确、高效、快速的特点。本论文研究高效液相色谱法测定花生芽中6-苄基腺嘌呤含量的方法,为花生芽中6-苄基腺嘌呤的检测提供技术参数。
 
  材料与方法
 
  仪器及材料 高效液相色谱仪:LC20AD(日本岛津公司);色谱柱:C18柱(250mm×4.6μm,美国waters公司);电子分析天平(日本岛津公司);微波炉(美的公司);离心机(sigma公司);超纯水系统(德国Millipore公司);刀片式均质器(德国IKA公司);超声波提取器(上海比朗)。
 
  6-苄基腺嘌呤标准品纯度均大于99%(德国Dr.Erenstorfer公司);甲醇(色谱纯,美国CNW公司);乙酸铵(分析纯,国药集团化学试剂有限公司)。
 
  仪器条件 流动相:甲醇:20mmol/L乙酸铵溶液(50:50,v/v),等度洗脱。流速:1.0mL/min;色谱柱温度:40℃;检测器:二极管阵列检测器,波长267nm;进样量:20μL。
 
  结果与讨论
 
  检测波长的确定 二极管阵列检测器能从190nm到900nm的全波段检测,要检测6-苄基腺嘌呤首先要确定其检测波长。配制6-苄基腺嘌呤的标准溶液,浓度为10.0mg/L,上机测定,从测定结果的光谱色谱三维图发现在5.8分钟有明显的响应,提取该时间点的吸收光谱图,结果见图1。
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  图1 6-苄基腺嘌呤的吸收光谱图
 
  图1中发现在210nm及267nm处均有吸收顶点,210nm处受到的干扰较大,因此选择267nm为6-苄基腺嘌呤的检测波长。
 
  流动相的选择 选择纯甲醇、甲醇-20mmol/L乙酸铵溶液(50:50,v/v)和甲醇-水(50:50,v/v)三种不同体系的流动相作比较,流速均为为1.0mL/min,进样浓度为1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤标准溶液,结果见图2。
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  图2 不同甲醇比例作为流动相的峰面积变化图
 
  从图2中,1号为纯甲醇流动相的色谱图,峰形不对称,出峰时间过早有可能与其他杂质重合或者分离不好;3号为甲醇-水(50:50,v/v)流动相的色谱图,峰形对称但是峰展宽较大;2号为甲醇-20mmol/L乙酸铵溶液(50:50,v/v)流动相的色谱图,峰形对称并且峰展宽小,乙酸铵在流动相中有改善峰形的作用,因此选择甲醇-20mmol/L乙酸铵溶液(50:50,v/v)作为测定6-苄基腺嘌呤的流动相。
 
  样品前处理 用甲醇提取花生芽中的6-苄基腺嘌呤,比较几种不同的提取方式,花生芽直接称样20.0g置于100mL的离心管中,加入50mL甲醇,用刀片式均质器均质2分钟。超声波提取:用超声波提取器提取30min;浸泡提取:在室温下放置10小时;微波提取:微波提取2分钟;各方法提取结束后冷却,5000r/min离心10分钟,取上层溶液过0.45μm滤膜,上机测定,结果见表1。表中微波提取法虽然用时少,但是结果偏低,可能的原因是提取时间不足或者是6-苄基腺嘌呤分解了,超声波提取效率高,因此选择超声波提取法提取花生芽中的6-苄基腺嘌呤。
 
                       表1 花生芽加标提取6-苄基腺嘌呤结果
 
  提取方式              浸泡法           微波提取法            超声波提取法
 
  结果(mg/kg)            9.82                5.39                             9.79
 
  方法学验证 线性关系及检出限 配制6-苄基腺嘌呤的系列标准溶液,上机测定,高效液相色谱法6-苄基腺嘌呤在1-50mg/L的范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9998,以基线噪声的三倍作为测定的检出限,6-苄基腺嘌呤的检出限为0.1mg/kg。
 
                                       表2 6-苄基腺嘌呤线性及检出限
 
  线性范围(mg/L)             线性关系                             R2                  检出限(mg/kg)
 
  1-50                            Y=1999.1X-716            0.9998                    0.1
 
  精密度及回收率 进样10.0mg/L的6-苄基腺嘌呤标准溶液,连续进样11次计算精密度,结果见表4,高效液相色谱法测定6-苄基腺嘌呤的精密度为1.82%,精密度符合测定的要求。
 
                              表3 6-苄基腺嘌呤精密度
 
  组分名称                           精密度(n=11)
 
                                        峰面积平均值             SD                   RSD%
 
  6-苄基腺嘌呤                      19626                  358                     1.82
 
  取花生芽样品,称样20.0g,添加6-苄基腺嘌呤标准溶液作为回收率的测试,按照3.3的前处理方法处理花生芽样品,回收率实验结果见表4。高效液相色谱法测定6-苄基腺嘌呤的回收率在90%以上,满足分析要求。
 
  表4 6-苄基腺嘌呤的回收率
 
  添加水平(mg/kg)            实测值(mg/kg)             平均回收率(%)
 
      0.5                                         0.57                              114.0
 
       10                                           9.79                              97.9
 
      50.0                                        48.7                               97.4
 
  建立了高效液相色谱法测定花生芽中6-苄基腺嘌呤含量的方法。通过提纯光谱,确定选择267nm为6-苄基腺嘌呤的检测波长;通过比较,选择甲醇-20mmol/L乙酸铵溶液(50:50,v/v)作为检测6-苄基腺嘌呤的流动相,流动加入乙酸铵能够很好地改善峰形;研究了前处理的提取方式,选择超声波提取法提取花生芽中的6-苄基腺嘌呤;对方法进行验证,高效液相色谱法测定花生芽中6-苄基腺嘌呤含量的在1-50mg/L范围线性良好,相关系数为0.9998,检出限为0.1mg/kg,精密度为1.82%,用该方法测定花生芽中6-苄基腺嘌呤含量的回收率在90%以上。高效液相色谱法测定花生芽中6-苄基腺嘌呤含量的方法准确,高效,可满足检测技术要求。
 
  参考文献
 
  [1]沙红,高燕,杨洪泽,等.6-苄基腺嘌呤对甜菜种子萌发的影响[J].中国糖料,2015,(4):28-29,32.
 
  [2]李小平,陈晓红,姚浔平,等.HPLC法测定豆芽中6-苄基腺嘌呤残留研究[J].中国卫生检验杂志,2005,(2):149-150,159.
 
  黄锐 湛江市质量计量监督检测所
 
  廖建萌 曾丹丹 黄国方 湛江市食品药品检验所
 
  
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